Klonowanie chromosomalnego DNA z Haemophilus influenzae. Jego zastosowanie do badania ekspresji kapsułki typu b i wirulencji.

Haemophilus influenzae może wytwarzać jeden z sześciu chemicznie odrębnych polisacharydów otoczkowych, ale tylko szczepy serotypu b otoczkowego zwykle powodują u ludzi zakażenie ogólnoustrojowe (np. Zapalenie opon mózgowych). Do zbadania ekspresji kapsułki typu b i jej związku z wirulencją H. influenzae zastosowano klonowanie molekularne DNA. Zjadliwy szczep H. influenzae typu b zastosowano do skonstruowania biblioteki lambda chromosomalnego DNA w Charon 4. Dwa niezależne izolowane rekombinowane fagi zostały wyizolowane z biblioteki i okazało się, że zawierają DNA niezbędne do ekspresji kapsułki typu b. Stosując dobrze scharakteryzowany szczurzy model zakażenia ogólnoustrojowego H. influenzae, wykazaliśmy, że transformanty typu b wywołane przez klonowany DNA były chorobotwórcze, powodując bakteriemię i zapalenie opon mózgowych, podczas gdy nietransformowane organizmy z niedoborem kapsułek H. influenzae nie były. Fragment EcoRI o wielkości 4,4 kb, wspólny dla obu klonów DNA, zastosowano do scharakteryzowania izolatów klinicznych reprezentujących wszystkie sześć zakapsułowanych serotypów, jak również kilku H. influenzae z niedoborem kapsułek za pomocą hybrydyzacji Southerna. Sonda hybrydyzowała z identycznym sklasyfikowanym (4,4 kb) fragmentem chromosomalnego DNA trawionego EcoRI z ośmiu niezależnie izolowanych szczepów typu b. Pojedyncze prążki homologii z sondą znaleziono również w fragmentach EcoRI chromosomalnego DNA uzyskanych z 33 kapsułkowanych, nie typu b H. influenzae. Jednak wielkość tych fragmentów EcoRI okazała się charakterystyczna dla każdego z różnych serotypów otoczki. Badania te stanowią podstawę do przeprowadzenia analizy molekularnej epidemiologii i wirulencji patogennych H. influenzae.Images
[patrz też: roksytromycyna, soplówka jeżowata, animed janów lubelski ]